Prueba TUNEL: detección ultrasensible de la apoptosis para garantizar la seguridad celular de los cosméticos.
La prueba TUNEL es un método esencial para detectar la fragmentación del ADN, un marcador característico de la muerte celular programada o apoptosis. Permite determinar si un ingrediente o producto cosmético puede inducir una apoptosis excesiva o no deseada en las células expuestas, un parámetro importante para garantizar la seguridad biológica de las formulaciones.
Las células se ponen primero en contacto con el producto en condiciones estrictamente controladas, representativas de su uso real. A continuación, los fragmentos de ADN generados durante el proceso apoptótico se marcan con indicadores fluorescentes o colorimétricos, lo que permite visualizar con precisión las células afectadas. La proporción de células marcadas y la intensidad de la señal permiten evaluar la magnitud del efecto observado.
Un índice elevado de células positivas puede revelar un riesgo potencial para la viabilidad celular, mientras que un índice bajo o nulo confirma la buena tolerancia del producto a este nivel biológico. Gracias a su elevada sensibilidad, la prueba TUNEL constituye una herramienta complementaria a otros análisis toxicológicos y genéticos utilizados en Suiza y en Europa para validar la inocuidad de los ingredientes activos y las formulaciones innovadoras.
El prueba TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labelling) es actualmente el método de referencia para identificar la fragmentación del ADN, marcador definitivo de la muerte celular programada (apoptosis). En el ámbito cosmético, permite verificar que un ingrediente o una formulación no desencadena una apoptosis excesiva, criterio esencial para la seguridad biológica de los productos destinados a la piel o las mucosas.
Principio de la prueba
- Exposición controlada – Las células humanas (queratinocitos, fibroblastos o células conjuntivales, según el producto sometido a prueba) se incuban con el producto en concentraciones que reproducen las condiciones de uso real.
- Marcado de roturas de ADN – La nucleotidil transferasa terminal (TdT) añade nucleótidos marcados (fluorocromos: FITC, Alexa 488; o sustratos colorimétricos) a los extremos 3'-OH de los fragmentos de ADN generados durante la apoptosis.
- Detección – Las células marcadas se visualizan con un microscopio de fluorescencia o se analizan mediante citometría de flujo. El porcentaje de células positivas y la intensidad de la señal cuantifican la magnitud de la apoptosis inducida.
¿Por qué el TÚNEL?
- Alta sensibilidad : detecta incluso niveles bajos de fragmentación del ADN, a menudo invisibles con las pruebas de viabilidad convencionales (MTT, azul de tripano).
- Especificidad : la coloración solo se produce cuando los fragmentos de ADN están realmente cortados, lo que evita los falsos positivos relacionados con daños superficiales.
- Compatibilidad con los requisitos normativos : las autoridades suizas (OCos/OSAV) y europeas (Reglamento CE 1223/2009) exigen una evaluación completa de la toxicidad celular para los ingredientes activos, en particular los de origen natural o biotecnológico.
- Integración en el DIP/PIF : los resultados (porcentaje de células TUNEL positivas, curvas dosis-respuesta) se incluyen directamente en el Dossier de Información del Producto (DIP) o en el Product Information File (PIF), lo que refuerza el expediente de comercialización.